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外泌体RNA测序

目    录
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背景简介

外泌体(Exosome)是由包括肿瘤细胞在内的几乎所有类型的细胞都可以产生并释放的一种微囊,其内部包裹了DNA,RNA,蛋白等物质。众多的研究表明,外泌体在血液,乳汁,尿液等体液内传播,其内容物如miRNA可被其他细胞吞噬,成为细胞间通讯的重要介质。越来越多的证据表明,宿主细胞或肿瘤细胞分泌的外泌体参与了肿瘤发生、生长、侵袭和转移。        外泌体上述特征和生物学功能,使其成为液体活检领域的重要研究对象,其所含RNA分子如miRNA,lncRNA,circRNA等是极具应用前景的临床诊断分子标志物。联川生物依托丰富的RNA项目经验和领先的生信分析实力,推出了针对外泌体RNA研究的系统解决方案,将协助科研人员深度开展外泌体mRNA、miRNA、lncRNA等的鉴定和功能分析.

技术优势

国内最早的外泌体研究科技服务商,外泌体RNA项目经验丰富
芯片和测序两大高通量检测平台,满足外泌体RNA的不同分析需求
采用更低样本量和专业外泌体分离试剂盒,更能胜任外泌体实验的独特性
多套外泌体RNA研究方案,满足外泌体mRNA,lncRNA,miRNA的不同研究需求

技术路线

分析内容

  

样本类型

血清(≥2 mL),血浆(≥ 2 mL),细胞上清液(≥ 15 mL),
乳汁(≥10 mL),尿液(≥ 15 mL),无DNA污染的总RNA等
建议总RNA起始量(单次):≥1 μg,浓度≥ 20 ng/μL (原则上越多越好)


近期用户文章 
1. Gu Y, Li M, Wang T, et al. Lactation-Related MicroRNA Expression Profiles of Porcine Breast Milk Exosomes[J]. Plos One, 2012, 7(8):e43691.
2. Gildea J J, Carlson J M, Schoeffel C D, et al. Urinary exosome miRNome analysis and its applications to salt sensitivity of blood pressure.[J]. Clinical Biochemistry, 2013, 46(12):1131-1134.
3. Yelamanchili S V, Lamberty B G, Rennard D A, et al. MiR-21 in Extracellular Vesicles Leads to Neurotoxicity via TLR7 Signaling in SIV Neurological Disease[J]. Plos Pathogens, 2015, 11(7):e1005032.
4. Song M, Wang Y, Shang Z F, et al. Bystander autophagy mediated by radiation-induced exosomal miR-7-5p in non-targeted human bronchial epithelial cells:[J]. Sci Rep, 2016, 6:3016

Q1:外泌体的提取方法有哪些?
A:外泌体的提取/富集方法有超高速离心,密度梯度离心,流式、磁珠筛选,高分子聚合物等。需要根据样品类型的不同选择不同的提取方法,这四类提取方法的外泌体产量、纯度以及所需样品量均不同,需要根据实际情况选择对应的提取方法。

Q2:如何进行外泌体鉴定?
A:外泌体鉴定目前采用的是电镜和West-blot。典型的外泌体电镜观察图是30-100nm 大小的球形或碗形囊泡。West-blot鉴定时可以选择外泌体特异性蛋白做 West-blot 鉴定。 WB 可以选择最多的蛋白一般是和 MVBs 合成相关的蛋白(Alix、 TSG101)及四次跨膜蛋白(CD9, CD63,CD81, CD82),同时 WB 时能做 non exosome marker 最好,比如,GRP94, EEA1,Cytochrome c, GM130, PMP70, Calreticulin, prohibitin 等,这些蛋白都是 exosome 没
有,细胞总蛋白中才有。

非靶向人类支气管上皮细胞旁自噬由辐射诱导的外泌体miR-7-5p介导


研究背景
辐射诱导的旁效应(RIBE)描述了一组非靶向细胞接收辐照细胞旁信号的生物学效应。在放射治疗中,RIBE会给癌旁正常组织带来潜在危害,具有比预想更高的风险。从辐照细胞到细胞外微环境,某些物质的过量释放会造成有害的影响。例如,细胞因子和活性氧已被证实通过细胞外介质或缝隙连接参与RIBE过程。然而,RIBE介导的信号和细胞间信息通路尚不完全清楚。


研究结果
在这项研究中,运用miRNA微流体芯片对外泌体miRNA进行了差异表达谱分析。研究人员首次从受2Gy γ射线照射的人支气管上皮BEP2D细胞的外泌体中鉴定出一组差异表达的miRNA。其中,外泌体中的miR-7-5p被发现诱导受体细胞自噬。外泌体介导的自噬明显被miR-7-5p抑制剂减弱。此外,我们的数据表明,由外泌体miR-7-5p诱导的自噬与EGFR PI3K/AKT/mTOR信号通路相关。同时,研究结果支持外泌体参与RIBE信号传播到旁细胞的过程。其中外泌体miR-7-5p是旁自噬的重要介质。


 
图 受体BEP2D细胞通过外泌体miR-7-5p诱导旁自噬
参考文献
Song M, Wang Y, Shang ZF, Liu XD, Xie DF, Wang Q, Guan H, Zhou PK. (2016) Bystander autophagy mediated by radiation-induced exosomal miR-7-5p in non-targeted human bronchial epithelial cells. Scientific Reports. 6:30165.

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