血脑屏障是指脑毛细血管壁与神经胶质细胞形成的血浆与脑细胞之间的屏障和由脉络丛形成的血浆和脑脊液之间的屏障，这些屏障能够阻止某些物质(多半是有害的)由血液进入脑组织。血脑屏障可使脑组织少受甚至不受循环血液中有害物质的损害，从而保持脑组织内环境的基本稳定，对维持中枢神经系统正常生理状态具有重要的生物学意义。
采用永生化细胞系建立的BBB模型应运而生，较为常用的永生化内皮细胞系如小鼠bEnd3和bEnd5，猪PBMEC/C1-2和人hCMEC/D3，以及非脑细胞系如CaCo-2，MDCK-MDR1，Huvecs和ECV304等。
评价体外模型成功与否的指标，主要基于体外模型的渗透性以及内皮细胞特定酶类的表达、紧密连接的形成。
1. Transwell预处理：移液器吸取2%明胶溶液100μl，放入Transwell上室中，浸润PET膜，置于37℃，5%CO2细胞孵箱静置30min，进行包被，用移液器吸出弃去明胶溶液，备用。
2. 体外BBB模型建立：当T25培养瓶中细胞生长密度大于 80-90%，进行细胞传代。弃去培养基，加入1ml PBS 缓慢冲洗培养瓶内的细胞，重复3次。
3. 加入1ml 0.25%胰酶，完全浸润细胞表面，放置 37℃细胞孵箱中静置消化 3-5min，在电子显微镜下观察，当细胞形态变圆回缩后，双手轻轻拍打培养瓶使绝大部分细胞脱落，快速加入 5ml 细胞完全培养基终止消化。
4. 使用移液器将 T25 培养瓶中的细胞悬液吸出至 15ml 的离心管中，离心，1000rpm，5min。使用移液器将离心管中上清液吸出弃去，加入细胞完全培养基重悬细胞。
5. 将细胞接种于包被了 2%明胶的 Transwell 小室上室的 PET 膜上，加至 250ul Huvecs 细胞完全培养基。将 C6 细胞接种于 24 孔 Transwell 小室的下室，加入 C6 完全培养基至 1000ul，保持 Transwell 小室上下室之间液面相平。设置实验组、单细胞组及空白对照组。
6. 每天换液并定时观察细胞的生长情况。大约 6-8 天观察细胞基本融合后，进行体外 BBB 模型评价的系列实验。
