RNA pull-down实验是检测与目的RNA结合的蛋白质。使用体外转录法标记生物素RNA探针,然后与胞浆蛋白提取液孵育,形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合,从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后,通过western blot实验检测特定的RNA结合蛋白是否与RNA相互作用。
1. 质粒转化、涂板、摇菌
2. 质粒中提
3. 质粒线性化
4. 琼脂糖凝胶电泳、切胶回收
5. 转录以及生物素标记、检测
1. 蛋白质、组织、细胞:-80℃保存,干冰运输;
2. 血液:EDTA抗凝管,4℃运输。